Ditko co-crée le personnage Spider-Man. 

Dans les années 60, figure emblématique de la naissance et de l'accomplissement de la célèbre maison d'édition Marvel Comics, où il a co-créé Spider-Man en 1961. Deux ans plus tard, lui est venue l'idée de dessiner Doctor Strange. Il est également le créateur du Gobelin Vert, du Lézard, de Sandman et de Doctor Octopus. En 1966, il quitte Marvel, en raison de mésentente avec son rédacteur en chef Stan Lee. Il a ensuite collaboré avec plusieurs autres maisons, dont la rivale DC Comics.

Jean-Marc Gilles